1聽聽范围

聽聽聽聽本标准规定了食品中霉菌和酵母（moulds聽and聽yeasts）的计数方法。

聽聽聽聽本标准适用于各类食品中霉菌和酵母的计数。

2聽聽设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

2.1聽聽培养箱：28聽℃±1聽℃。

2.2聽聽拍击式均质器及均质袋。

2.3聽聽电子天平：感量0.1聽g。

2.4聽聽无菌锥形瓶：容量500聽mL。

2.5聽聽无菌吸管：1聽mL(具0.01聽mL刻度)、10聽mL(具0.1聽mL刻度)。

2.6聽聽无菌试管:聽18聽mm×180聽mm。

2.7聽聽旋涡混合仪。

2.8聽聽无菌平皿：直径90聽mm。

2.9聽聽恒温水浴箱：46聽℃±1聽℃。

2.10聽聽显微镜：10×。

3聽聽培养基和试剂

3.1聽聽生理盐水：见附录A中A.1。

3.2聽聽马铃薯葡萄糖琼脂：见附录A中A.2。

3.3聽聽孟加拉红琼脂：见附录A中A.3。

4聽聽检验程序

5聽聽操作步骤

5.1聽聽样品的稀释

5.1.1聽聽固体和半固体样品：称取25聽g样品，加入225聽mL无菌稀释液（水或生理盐水），充分振摇，或用拍击式均质器拍打2聽min，制成1:10的样品匀液。

5.1.2聽聽液体样品：以无菌吸管吸取25聽mL样品至盛有225聽mL无菌稀释液（水或生理盐水）的锥形瓶（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）或无菌均质袋中，充分振摇或用拍击式均质器拍打2聽min，制成1:10的样品匀液。

5.1.3聽聽取1聽mL聽1:10样品匀液注入含有9聽mL无菌稀释液的试管中，另换一支1聽mL无菌吸管反复吹吸，或在旋涡混合仪上混匀，此液为1:100的样品匀液。

5.1.4聽聽按5.1.3操作程序，制备10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1支1聽mL无菌吸管。

5.1.5聽聽根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取1聽mL样品匀液于2个无菌平皿内。同时分别取1聽mL无菌稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。

5.1.6聽聽及时将20聽mL～25聽mL冷却至46聽℃的马铃薯葡萄糖琼脂或孟加拉红琼脂（可放置于46聽℃±1聽℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。置水平台面待培养基完全凝固。

5.2聽聽培养

琼脂凝固后，正置平板，置28聽℃±1聽℃培养箱中培养，观察并记录，培养至第5聽d的结果。

5.3聽聽菌落计数

用肉眼观察，必要时可用放大镜或低倍镜，记录稀释倍数和相应的霉菌和酵母菌落数。以菌落形成单位（colony-forming聽units，CFU）表示。

选取菌落数在10聽CFU～150聽CFU的平板，根据菌落形态分别计数霉菌和酵母。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为菌落蔓延。

6聽聽结果与报告

6.1聽聽结果

6.1.1　计算同一稀释度的两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数。

6.1.2　若有两个稀释度平板上菌落数均在10聽CFU～150聽CFU之间，则按照GB聽4789.2的相应规定进行计算。

6.1.3聽聽若所有平板上菌落数均大于150聽CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。

6.1.4聽聽若所有平板上菌落数均小于10聽CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

6.1.5聽聽若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。

6.2聽聽报告

6.2.1聽聽菌落数按“四舍五入”原则修约。菌落数在10以内时，采用一位有效数字报告；菌落数在10～100之间时，采用两位有效数字报告。

6.2.2聽聽菌落数大于或等于100时，前第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数来表示结果；也可用10的指数形式来表示，此时也按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字。

6.2.3　若空白对照平板上有菌落出现，则此次检测结果无效。

6.2.4聽聽称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告，报告或分别报告霉菌和/或酵母数。

附聽聽录A

培养基和试剂

A.1聽聽生理盐水

A.1.1聽聽成分

聽聽聽聽聽聽氯化钠聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽8.5聽g

聽聽聽聽聽聽蒸馏水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽1聽000聽mL

A.1.2聽聽制法

聽聽聽聽氯化钠加入1000聽mL蒸馏水中，搅拌至完全溶解，分装后，121聽℃灭菌20聽min，备用。

A.2聽聽马铃薯葡萄糖琼脂

A.2.1聽聽成分

聽聽聽聽聽聽马铃薯(去皮切块)聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽300聽g

聽聽聽聽聽聽葡萄糖聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽20.0聽g

聽聽聽聽聽聽琼脂聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽20.0聽g

聽聽聽聽聽聽氯霉素聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽0.1聽g

聽聽聽聽聽聽蒸馏水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽1聽000聽mL

A.2.2聽聽制法

聽聽聽聽将马铃薯去皮切块，加1000聽mL蒸馏水，煮沸10聽min～20聽min。用纱布过滤，补加蒸馏水至1000聽mL。加入葡萄糖和琼脂，加热溶解，分装后，121聽℃灭菌20聽min，备用。

A.3聽聽孟加拉红琼脂

A.3.1聽聽成分

聽聽聽聽聽聽蛋白胨聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽5.0聽g聽

聽聽聽聽聽聽葡萄糖聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽10.0聽g

聽聽聽聽聽聽磷酸二氢钾聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽1.0聽g

聽聽聽聽聽聽硫酸镁（无水）聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽0.5聽g

聽聽聽聽聽聽琼脂聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽20.0聽g

聽聽聽聽聽聽孟加拉红聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽0.033聽g

聽聽聽聽聽聽氯霉素聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽0.1聽g

蒸馏水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽1聽000聽mL

A.3.2聽聽制法

上述各成分加入蒸馏水中，加热溶解，补足蒸馏水至1聽000聽mL，分装后，121℃灭菌20聽min，避光保存备用。

附聽聽录B

霉菌直接镜检计数法

聽聽聽聽常用的为郝氏（Howard）霉菌计测法，本方法适用于番茄酱罐头、番茄汁。

B.1聽聽设备和材料

B.1.1聽聽折光仪。

B.1.2聽聽显微镜。

B.1.3聽聽郝氏计测玻片：具有标准计测室的特制玻片。

B.1.4聽聽盖玻片。

B.1.5聽聽测微器：具标准刻度的玻片。

B.2聽聽操作步骤

B.2.1聽聽检样的制备：取定量检样，加蒸馏水稀释至折光指数为1.3447～1.3460（即浓度为7.9%～8.8%），备用。

B.2.2聽聽显微镜标准视野的校正：将显微镜按放大率90～125倍调节标准视野，使其直径为1.382mm。

B.2.3聽聽涂片：洗净郝氏计测玻片，将制好的标准液，用玻璃棒均匀的摊布于计测室，加盖玻片，以备观察。

B.2.4聽聽观测：将制好之载玻片置于显微镜标准视野下进行观测。一般每一检样每人观察50个视野。同一检样应由两人进行观察。

B.2.5聽聽结果与计算：在标准视野下，发现有霉菌菌丝其长度超过标准视野（1.382聽mm）的1/6或三根菌丝总长度超过标准视野的1/6（即测微器的一格）时即记录为阳性（＋），否则记录为阴性（－）。

B.2.6聽聽报告：报告每100个视野中全部阳性视野数为霉菌的视野百分数（视野％）。

聽

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