聽聽聽
聽聽聽(2)聽沙门氏菌(Salmonella聽species)聽聽取营养肉汤培养基3份，每份各100ml,2份分
别加入规定量的供试液，其中1份加入对照菌液作阳性对照，第3份加入与供试液等量的
稀释剂作空白对照。培养18～24小时，空白对照应无菌生长。取其余2份培养液各1ml，
分别接种于四硫磺酸钠亮绿培养基10ml中，培养18～24小时。分别划线接种于胆盐硫乳
琼脂（或沙门氏、志贺氏菌属琼脂）培养基和麦康凯琼脂（或曙红亚甲蓝琼脂）培养基
的平板上，培养18～24小时或延至40～48小时。当阳性对照的平板呈现阳性菌落时，供
试品的平板无菌落生长，或有菌落但不同于表2所列特征时，可判为未检出沙门氏菌。
聽聽聽聽如供试品平板生长的菌落特征有与表2所列菌落形态特征相符或疑似者，均应挑选2
～3个菌落分别接种于三糖铁琼脂培养斜面上，阳性对照同时接种,培养18～24小时后，
阳性对照的斜面应为红色，底层为黄色，硫化氢阳性，而供试品疑似菌斜面未见红色、
底层未见黄色，可判为未检出沙门氏菌。否则，应继续做革兰氏染色、生化试验、动力
检查与血清凝集试验。
聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽表2聽聽聽沙门氏菌菌落形态特征
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聽　培聽养聽基聽　│聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽菌聽聽落聽聽形聽聽态
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胆盐硫乳琼脂　│无色至浅橙色，半透明，菌落中心带黑色或全部黑色或无黑色。
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沙门氏、志贺　│无色至淡红色，半透明或不透明，菌落中心有时带黑褐色。
氏菌属琼脂　聽聽│
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曙红亚甲蓝琼脂│无色至浅橙色，透明或半透明，光滑湿润的圆形菌落。
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麦康凯琼脂聽　聽│无色至浅橙色，透明或半透明，菌落中心有时为暗色。
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聽聽聽聽革兰氏染色聽聽照大肠杆菌项下方法操作，镜检。
聽聽聽聽靛基质试验聽聽照大肠杆菌项下操作并判断结果。
聽聽聽聽尿素酶试验聽聽取疑似菌斜面培养物接种于尿素琼脂培养基斜面上，培养24小时，斜
面变为红色为阳性，不变色为阴性。
聽聽聽聽氰化钾试验聽聽聽取培养20～24小时的疑似菌株营养肉汤培养液，分别用白金耳沾取1
环，接种至对照培养基及氰化钾培养基内，立即以橡胶塞塞紧，培养24～48小时，对照
管应有菌生长，试验管有菌生长者为阳性，无菌生长为阴性。
聽聽聽聽赖氨酸脱羧酶试验聽聽取疑似菌斜面培养物分别接种赖氨酸脱羧酶培养基及对照培养
基上。培养24～48小时，对照管应为黄色，试验管呈紫色为阳性，呈黄色为阴性。
聽聽聽聽动力检查聽聽取疑似菌斜面培养物穿刺接种于半固体营养琼脂培养基管中，培养24小
时，细菌沿穿刺线外周扩散生长，为动力阳性，否则为阴性。阴性培养物，应在室温保
留2～3天后，再判断。
聽聽聽聽血清凝集试验聽聽在洁净载玻片一端，以白金耳沾取沙门氏菌属A～F“0”聽多价血清
2～3环，再取斜面上部的培养物少许，与血清混合，将玻片前后侧动,如出现凝集现象,
应以0.9％氯化钠溶液与同株培养物作对照试验,无凝集现象时判为血清凝集阳性。时有
反应迟缓，需将玻片与湿棉球置平皿内，约过20分钟，再观察。仍未出现凝集时，应取
斜面培养物，置含少量0.9％氯化钠溶液的试管中，制成浓菌悬液，在100℃水浴中保温
30分钟，待冷，再作凝集试验。如出现凝集，应判为阳性，否则为阴性。
聽聽聽上述各项试验反应，一般应为硫化氢阳性（或阴性），靛基质阴性，尿素酶阴性,氰
化钾阴性，赖氨酸脱羧酶阳性，动力检查阳性，A～F“0”聽多价血清凝集试验阳性。各
鉴定结果按表3判定。聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽
聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽表3聽聽聽沙门氏菌检查结果判定
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聽聽序│聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽血清凝集试验聽聽聽聽聽聽聽│聽聽聽聽聽聽聽聽│
聽聽聽聽│聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽(A～F“0”聽血清)聽聽聽聽聽│聽聽聽聽聽聽聽聽│
聽聽聽聽├──┬───────┬──────┤生化试验│聽聽聽聽结聽聽果
聽聽聽聽│凝集│聽聽100℃30分钟聽│0.9％氯化钠聽│聽聽聽聽聽聽聽聽│
聽聽号│反应│聽聽聽聽凝集反应聽聽│溶液对照聽聽聽聽│聽聽聽聽聽聽聽聽│
──┼──┼───────┼──────┼────┼─────────
聽聽1聽│阳性│聽聽聽阳聽聽性聽聽聽聽聽│聽聽阴聽聽性聽聽聽聽│聽聽符聽聽合│检出沙门氏菌
聽聽2聽│阴性│聽聽聽阳聽聽性聽聽聽聽聽│聽聽阴聽聽性聽聽聽聽│聽聽符聽聽合│检出沙门氏菌
聽聽3聽│阴性│聽聽聽阴聽聽性聽聽聽聽聽│聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽│聽聽不符合│未检出沙门氏菌
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聽聽聽上述各项试验任何一项不符合或有可疑反应的培养物,均应进一步鉴定后作出结论。
聽聽聽聽(3)聽绿脓杆菌(Pseudomonas聽aeruginosa)聽聽取胆盐乳糖培养基3份，每份各100ml，
2份分别加入规定量的供试液，其中1份加入对照菌液作为阳性对照,第3份加入与供试液
等量的稀释剂作空白对照。培养18～24小时，空白对照应无菌生长,其余2份培养液划线
接种于十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基平板上，培养18～24小时。当阳性对照的平板呈
现阳性菌落时，供试品的平板无菌落或无疑似菌落生长，可判为未检出绿脓杆菌。
聽聽聽聽绿脓杆菌典型菌落呈扁平、无定形、周边扩散，表面湿润，灰白色，周围时有蓝绿
色素扩散。如生长菌落具有上述特征或疑似者，应挑选2～3个菌落，分别接种营养琼脂
培养基斜面上，培养18～24小时，取培养物革兰氏染色，并作氧化酶试验。
聽聽聽聽氧化酶试验聽聽取洁净滤纸片置于平皿内，用无菌玻璃棒取营养琼脂培养基斜面培养
物涂于滤纸片上，再滴加新配制的1％二甲基对苯二胺盐酸盐试液,在30秒内呈粉红色逐
渐变为紫红色为氧化酶试验阳性。否则为阴性。
聽聽聽聽如证实为非革兰氏阴性无芽孢杆菌或氧化酶试验阴性，均可判为未检出绿脓杆菌。
否则，应进行绿脓菌素试验。
聽聽聽聽绿脓菌素(Pyocyanin)聽试验聽聽取上述琼脂斜面培养物，接种于绿脓菌素测定用培养
基斜面上，培养24小时后，在试管内加氯仿3～5ml,搅碎培养基并充分振摇。静置片刻,
将氯仿移至另一试管中，加入1mol/L盐酸溶液约1ml,振摇后，静置片刻，如在盐酸溶液
层内出现粉红色，即为绿脓菌素阳性。试验同时应有空白对照试验。
聽聽聽聽当空白对照试验呈阴性时，供试品检查为革兰氏阴性杆菌、氧化酶试验阳性及绿脓
菌素阳性、可判定为检出绿脓杆菌。
聽聽聽聽绿脓菌素阴性的培养物，应继续以下试验。
聽聽聽聽硝酸盐还原产气试验聽聽取营养琼脂培养基斜面培养物,接种于硝酸盐胨水培养基中,
培养24小时，如在培养基的杜氏管中有气体产生，即为阳性。
聽聽聽聽42℃生长试验聽营养琼脂培养基斜面培养物于0.9％无菌氯化钠溶液中,制成菌悬液,
再将菌悬液接种于营养琼脂培养基斜面上，立即置41±1℃水浴中培养24～48小时,有菌
苔生长者为阳性；否则为阴性。
聽聽聽聽明胶液化试验聽聽以接种针沾取营养琼脂培养基斜面培养物，穿刺于明胶培养基内，
培养24小时，取出置冰箱内10～30分钟。如培养基仍呈溶液状，为阳性。
聽聽聽聽当革兰氏阴性杆菌，氧化酶试验阳性，绿脓菌素试验为阴性，其硝酸盐还原产气试
验、42℃生长试验及明胶液化试验均为阳性时，应判为检查绿脓杆菌。
聽聽聽聽(4)聽金黄色葡萄球菌(Staphylococcus聽aureus)聽聽聽取亚碲酸钠肉汤（或营养肉汤）
培养基3份，每份各100ml，2份分别加入规定量的供试液，其中1份加入对照菌液作为阳
性对照，第3份加入与供试液等量的稀释剂作为空白对照。均培养18～24小时(必要时可
延至48小时)。空白对照应无菌生长。取其余2份培养液划线接种于卵黄高盐琼脂培养基
平板上或甘露醇高盐琼脂培养基平板上，培养24～72小时。当阳性对照的平板呈现阳性
菌落时，供试品的平板如无菌落生长，或有菌落但不同于表4所列特征,可判为未检出金
黄色葡萄球菌。
聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽表4聽聽金黄色葡萄球菌菌落形态特征
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聽聽培养基聽聽│聽聽聽聽聽聽菌聽聽聽聽聽落聽聽聽聽形聽聽聽聽聽态聽聽聽聽聽聽
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卵黄高盐聽聽│金黄色、圆形凸起，边缘整齐，外围有
琼脂聽聽聽聽聽聽│卵磷脂分解的乳浊圈，菌落直径1～2mm
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甘露醇高盐│金黄色，圆形凸起，边缘整齐，外围有
琼脂聽聽聽聽聽聽│黄色环，菌落直径约0.7～1mm聽聽聽聽聽聽聽聽
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聽聽聽聽如有菌落生长并与表4所列特征相符或疑似时,应挑选2～3个菌落，分别接种于营养
琼脂培养基斜面上，培养18～24小时，取其培养物革兰氏染色，并作血浆凝固酶试验。
聽聽聽聽血浆凝固酶试验聽聽取灭菌小试管3支，各加入血浆①－无菌水(1:1)0.5ml，1支加入
被检菌株的营养肉汤培养液（或浓菌悬液）0.5ml,其余2支作对照管；1支加入金黄色葡
萄球菌的营养肉汤培养液或菌悬液0.5ml作阳性对照;另1支加入营养肉汤或0.9％氯化钠
溶0.5ml作空白对照。将3管同时培养。3小时后开始检查,以后适当时间逐次观察直至24
小时。空白对照管的血浆流动自如，阳性对照管血浆凝固，试验管血浆凝固者为阳性；
阳性对照管和空白对照管任何一管不符合要求时，应另制备血浆，重新试验。
聽聽聽聽当空白对照和阳性对照符合要求，供试品的菌株为革兰氏阳性球菌、血浆凝固酶试
验阳性，判定为检出金黄色葡萄球菌。
聽聽聽聽结果判断
聽聽聽聽细菌菌落数、霉菌（酵母菌）菌落数、控制菌三项均符合该品种微生物限度项下规
定，应判供试品合格；其中任何一项不符合该品种项下规定，应判供试品不合格。
聽聽聽聽细菌菌落数、霉菌(酵母菌)菌落数第一次测定超过该品种项下微生物限度规定时，
应从同一批号样品中随机抽样，复试两次，以三次结果平均值报告。
聽聽聽聽眼科用药的霉菌和酵母菌菌落数复试报告，须以二次复试结果均不得长菌，方可判
为供试品合格。
聽聽聽聽如发现营养琼脂培养基平板生长霉菌（酵母菌）菌落数或虎红琼脂培养基平板上生
长细菌菌落数超过该品种项下微生物限度规定时，应判为供试品不合格。
聽聽聽聽各类制剂检出控制菌或其他致病菌时，按一次检出结果为准，不再抽样复试，即应
判该供试品不合格。
聽聽聽聽①聽聽血浆的制备聽聽以无菌注射器吸取灭菌的含5％枸橼酸钠的0.9％氯化钠溶液1ml,
用无菌操作采取家兔（或羊、人）血9ml,轻轻混匀数分钟。待血液不凝固时，徐徐放入
灭菌离心管中，离心，分离血浆，用灭菌吸管取血浆移至灭菌试管中，置冰箱内备用。
临用前必须用已知血浆凝固酶试验阳性的金黄色葡萄球菌测试，证明血浆合格后，方可
用于试验。

聽

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