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志贺氏菌检验



录入时间:2008-9-22 15:00:43 来源:青岛海博论坛论坛


1聽聽主题内容与适用范围聽
本标准规定了食品中志贺菌的检验方法。聽
本标准适用于食品和食物中毒样品中志贺氏菌的检验。聽
2聽聽引用标准聽
聽聽聽聽GB聽4789.28聽聽食品卫生微生物学检验聽聽染色法、培养基和试剂聽
3聽聽设备和材料聽
3.1聽聽天平:乐取检样用。聽
3.2聽聽均质器或乳钵。聽
3.3聽聽温箱。聽
3.4聽聽显微镜。聽
3.5聽聽灭菌广口瓶:500聽mL。聽
3.6聽聽灭菌三角烧瓶:500聽mL,250聽mL。聽
3.7聽聽灭菌平皿:90聽mm×15聽mm。聽
3.8聽聽载玻片。聽
3.9聽聽酒精灯。聽
3.10聽聽灭菌金属匙或玻璃棒。聽
3.11聽聽接种棒,镍铬丝。聽
3.12聽聽试管架,试管篓。聽
3.13聽聽硝酸纤维素滤膜:150聽mm×50聽mm,Φ0.45聽um。临用时切成两张,每张
70聽聽mm×50聽聽mm,用铅笔划格,每格聽6聽聽mm×6聽聽mm。每行10格,分6行。灭菌备用。聽聽
4聽聽培养基和试剂聽
4.1聽聽CN聽增菌液:按聽GB聽4789.28聽中聽4.17聽规定。聽
4.2聽聽HE聽琼脂:按聽GB聽4789.28聽中聽4.21聽规定。聽
4.3聽聽SS聽琼脂:按聽GB聽4789.28聽中聽4.22聽规定。聽
4.4聽聽麦康凯琼脂:按聽GB聽4789.28聽中聽4.24聽规定。聽
4.5聽聽伊红美蓝琼脂(EMB)聽:按聽GB聽4789.28聽中聽4.25聽规定。聽
4.6聽聽三糖铁琼脂(TSI)聽:按聽GB聽4789.28聽中聽4.26、4.27聽规定。聽
4.7聽聽葡萄糖半固体管:按聽GB聽4789.28聽中聽4.31聽规定。聽
4.8聽聽半固体管:按聽GB聽4789.28聽中聽4.30聽规定。聽
4.9聽聽葡萄糖铵琼脂:按聽GB聽4789.28聽中聽4.30聽规定。聽
4.10聽聽尿素琼脂(pH7.2)聽:按聽GB聽4789.28聽中聽3.15聽规定。聽
4.11聽聽西蒙氏柠檬酸盐琼脂:按聽GB聽4789.28聽中聽3.5聽规定。聽
4.12聽聽氰化钾(KCN)培养基:按聽GB聽4789.28聽中聽3.16聽规定。聽
4.13聽聽氨基酸脱羧酶试验培养基:赖氨酸、鸟氨酸及对照培养基,按GB聽聽4789.28
中聽3.12聽规定。聽
4.14聽聽糖发酵管:棉子糖、甘露醇、甘油、七叶苷,按聽GB聽4789.28聽中聽4.32聽规
定。聽
4.15聽聽5%乳糖发酵管:按聽GB聽4789.28聽中聽4.32聽规定。聽
4.16聽聽蛋白胨水、靛基质试剂:按聽GB聽4789.28聽中聽3.13聽规定。聽
4.17聽聽志贺氏菌属诊断血清。聽
5聽聽检验程序聽
聽聽聽聽志贺氏菌检验程序如下:聽
6聽聽操作步骤聽
6.1聽聽增菌聽
聽聽聽聽称取检样聽25聽g,加入装有聽225聽mLGN聽增菌液的聽500聽mL聽广口瓶内,固体食品
用均质器以8000~10000聽r/min聽打碎1聽min,或用乳钵加灭菌砂磨碎,粉状食品
用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化,于聽36℃培养聽6~8聽h。培养时间视细菌生长情
况而定,当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。聽
6.2聽聽分离和初步生化试验聽
6.2.1聽聽取增菌液聽1聽环,划线接种于聽HE聽琼脂平板或聽SS聽琼脂平板聽1聽个;另取聽1
环划线接种于麦康凯琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板聽1个,于36℃培养18~24聽h,
志贺氏菌在这些培养工丰呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。聽
6.2.2聽聽挑取平板上的可疑菌落,接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各聽1聽管。一
般应多挑几个菌落,以防遗漏,经聽36℃培养聽18~24聽h,分别观察结果。聽
6.2.3聽聽下述培养物可以弃去:聽
a.聽在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物;聽
b.聽在聽18~24聽h聽内发酵乳糖、蔗糖的培养物;聽
c.聽不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物;聽
d.聽产气的培养物;聽
e.聽有动力的培养物;聽
f.聽产生硫化氢的培养物聽;聽
6.2.4聽聽凡是乳糖、蔗糖不发酵,葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌聽6聽型可产
生少量气体),无动力的菌株,可做血清学分型和进一步的生化试验。聽
6.3聽聽血清学分型和进一步的生化试验聽
6.3.1聽聽血清学分型聽
挑取三糖铁琼脂上的培养物,做玻片凝集试验。先用4聽种志贺氏菌多价血清
检查,如果由于聽K抗原的存在大同小而不出现凝集,应将菌液煮沸后再检查;如
果呈现凝集,则用A1、A2、B聽群多价和聽D群血清分别试验。如系B聽群福氏志贺氏
菌,则用群和型因子血清分别检查。福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表
1。可先用群因子血清检查,再根据群因子血清出现凝集的结果,依次选用型因
子血清检查。聽
4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株,可用鲍氏多价1、2、3分别检查,并
进一步用1~15各型因子血清检查。如果鲍氏多价血清不凝集,可用痢疾志贺氏
菌聽3~12聽型多价血清及各型因子血清检查。聽
聽聽聽聽注:+凝集;-不凝集;()有或无。聽
6.3.2聽聽进一步的生化试验聽
在做血清学分型的同时,应做进一步的生化试验,即:葡萄糖铵,西蒙氏柠
檬酸盐,赖氨酸和鸟氨酸脱羟酶,pH7.2聽尿素,KCN聽生长,以及水杨苷和七叶苷
的分解。除宽阔内氏菌和鲍氏聽13聽型为乌氨酸阳性外,志贺氏菌属的培养物均为
阴性结果。必要时还应做革兰氏染色检查和氧化酶试验,应为氧化酶阴性的革兰
氏阴性某杆菌。生化反应不符合的菌株,即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝
集,仍不得判定为志贺氏菌属的培养物。聽
已判农副业志贺氏菌属的培养物,应进一步做聽5%乳糖发酵,甘露醇、棉子
糖和甘油的发酵和靛基质试验。志贺氏菌属4个生化群的培养物,应符合该群的
生化特性。但福氏聽6聽型的生化特性与聽A聽群或聽C聽群相似,见表聽2。聽
聽附加说明:聽
本标准由卫生部卫生监督司提出。聽
本标准由江西省卫生防疫站负责起草。聽
本标准主要起草人何晓青。聽
本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。聽聽聽聽
聽聽聽

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