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        菌种保存培养基



        录入时间:2012-7-17 8:45:17 来源:生物谷论坛

        一、菌种保存培养基
        聽聽 [配法]
        聽聽聽 蛋白胨10g,牛肉膏5g,氯化钠3g,磷酸氢二钠2g,琼脂粉4.5g,蒸馏水1L 。聽聽
        将上述成分混合于水中,加热溶解,调pH至7.4~7.6,分装试管2/3左右高度,121℃高压灭菌15min,成为半固体培养基,备用。
        聽聽 [质量控制]
        聽聽 培养基呈淡黄色半固体状。大肠埃希菌(ATCC 25922)生长良好,动力阳性;福氏志贺菌(ATCC 12022)生长良好,动力阴性;金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)生长良好,动力阴性。
        二、增菌培养基
        聽聽 1.葡萄糖肉汤
        [用途]
        用于血液增菌。
        聽聽 [配法]
        聽聽聽 蛋白胨(或月示 胨)10g,氯化钠5g,肉浸液(或心浸液)1L,葡萄糖3g,枸橼酸钠3g,5g/L对氨基苯甲酸水溶液10ml,1mol/L硫酸镁溶液20ml,青霉素酶1000 U。聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽
        聽聽聽 将蛋白胨、氯化钠混合于肉浸液中加热溶解,再加入葡萄糖、枸橼酸钠、对氨苯甲酸及硫酸镁,继续煮沸5min,并补足失水,调整pH至7.8。
        过滤分装,每瓶50ml,高压灭菌115℃20min后,每瓶加入青霉素酶50 U,经无菌试验合格后,冷却备用。
        聽聽聽 [用法]
        聽聽聽 将采取的血液标本,以无菌手续注入培养瓶中(血液1ml,培养液10ml),置35℃培养箱内,每天1次取出观察结果。如有细菌生长,可出现数种不同的表现,应随时作分离培养,可选用血琼脂、伊红美蓝琼脂及巧克力琼脂平板等。无细菌生长表现的培养瓶,需连续观察7d,仍无细菌生长方可弃去。在观察的过程中,至少应作两次分离培养。
        注:
        ⑴ 枸橼酸钠为抗凝剂,可使血液加入培养基中不凝固。
        聽聽聽 ⑵ 对氨基苯甲酸主要中和血液中磺胺类药物的抑菌作用。
        聽聽聽 ⑶ 硫酸镁主要抑制血液中存在的四环素、金霉素、新霉素、多粘菌素及链霉素的抑菌作用。
        ⑷ 本培养基近年来有许多改良配方,如加入0.3%~0.5%酵母浸膏以增加营养;加0.2%核酸刺激细菌生长;加0.1%粘液素能被覆于细菌的表面,保护细菌免受抗体破坏;加入聚茴香脑磺酸钠(SPS)能中和补体的抗药作用从而提高检出率。
        聽聽 2.血液增菌培养基
        聽聽 [用途]
        聽聽聽 血液和骨髓液病原菌的增菌培养。
        聽聽 [配法]
        聽聽聽 蛋白胨10g,氯化钠5g,牛肉膏3g,葡萄糖1g,酵母膏粉3g,枸橼酸钠3g,磷酸氢二钾2g,5g/L对氨基苯甲酸溶液5ml,1mol/L硫酸镁溶液20ml, 4g/L酚红溶液6ml,青霉素酶50 U,聚茴香脑磺酸钠(SPS) 0.3g,蒸馏水1L。聽聽聽
        聽聽 将上述成分(除酚红指示剂、青霉素酶外)混合加热溶解,校正pH至7.4,再加酚红,过滤分装每瓶30~50ml,经121℃灭菌15min和35℃24h无菌试验备用。临用时每瓶加入1.5~2.5 U青霉素酶。
        [质量控制]
        聽聽聽 伤寒沙门菌ATCC 50096、白色念珠菌ATCC 10231、化脓性链球菌ATCC聽聽 19615、肺炎链球菌ATCC 6305、金黄色葡萄菌ATCC 25923、铜绿假单胞菌ATCC 27853均生长良好。

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