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    大肠杆菌DNA纯化



    录入时间:2011-6-20 15:17:29 来源:互联网

    用苯酚:氯仿抽提
    1.聽把样品至置于离心管中,加入等体积的苯酚:氯仿,
    2.聽混匀,使之成为乳浊状;
    3.聽12000rpm离心, 5 分钟:
    4.聽用枪头把水相移到另一离心管中.
    5.聽加入等体积氯仿并重复2—4
    6.聽用2/3体积的异丙醇(或2倍无水乙醇),1/10体积的3M醋酸钠,沉淀10分钟(-20度长时间沉淀可提高产量)
    7.聽聽12000rpm离心5分钟,弃液体
    8.聽70%的乙醇洗盐10分钟,去上清,
    9.聽重复8一次,再12000rpm离心弃液体.
    10.聽50度烘干.
    11.聽去离子水溶解。
    LiCl 抽提
    1把样品至置于离心管中,加4/5体积10M LiCl
    2 室温下静置1分钟
    3 12000rpm离心5分钟
    4把液体转移到另一离心管中
    5.加2/3体积的异丙醇沉淀10分钟
    往下的步骤同于上面的8-12
    E.coil总DNA的提取
    1聽聽将过夜培养的大肠杆菌离心去上清。
    2聽聽加500μl水重悬浮,加入500μl 2% SDS, 混合振荡约1min,55℃温育15min,直到溶液的粘度显著下降。
    3聽聽加入0.1倍体积的3mol/L醋酸钠(自然pH)。
    4聽聽加入150μl中性苯酚,混合振荡均匀后,12000rpm离心5min,移取上清液,弃去白色中间层。
    5聽聽用中性苯酚/氯仿重复抽提直至看不见(或非常少)中间层为止,
    6聽聽加入1倍体积的异丙醇(或2倍体积的无水乙醇),上下颠倒混合直至出现白色絮状DNA 沉淀团,用吸头挑出DNA沉淀团。
    7聽聽用70%乙醇洗涤DNA沉淀团两次。
    8聽聽烘干,溶解DNA沉淀。

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