1.聽聽聽 糖、醇发酵培养基

（1）成分

基础液

蛋白胨聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 10ml

氯化钠聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽5g

0.5%酸性品红指示液聽聽聽聽聽10ml （或0.4％溴麝香草酚蓝指示液）( 6 ml )

水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 1000ml

糖、醇类聽 每100ml 基础液内各加0.5g

（2）制法聽
聽聽聽聽 聽取蛋白胨和氯化钠加入水中，微温使溶解，调pH 值使灭菌后为7.3±0.1，加入指示液混匀。每100ml 分别加人l 种糖、醇或糖苷，混匀后分装于小管中（若需观察产气反应，在小管内另放置杜汉小倒管）。于116 ℃ 灭菌15 分钟。
聽聽聽聽常用的糖、醇或糖苷：阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、蕈糖、纤维二糖、蜜二搪、棉子糖、松三糖、菊糖、糊精、淀粉、甘露醇、卫矛醇、山梨醇、肌醇、甘油、水杨素、七叶苷等。
（3）用途聽
聽聽聽聽聽 鉴别各种细菌对糖类的发酵生化反应，发酵者产酸，培养基变色（加酸性品红者由无色至红色或再至黄色；加溴麝香草酚蓝者由蓝色至黄色）；产气时，小倒管内有小气泡。
2 ．七叶苷培养基
（1）成分

蛋白胨聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 5g

七叶苷聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 3g

磷酸氢二钾聽聽聽聽聽聽 1g

水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 1000ml

枸橼酸铁聽聽聽聽聽聽聽聽聽0.5g
( 2 )制法聽
聽聽聽聽聽聽除七叶苷外，取上述成分混合，微温使溶解，加入七叶苷混匀，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1，分装于试管中，121 ℃ 灭菌15 分钟。
( 3 )用途聽聽 用于鉴别细菌对七叶苷的水解试验，产生棕黑色沉淀为阳性反应。
3 ．磷酸盐葡萄糖胨水培养基
( 1 ）成分

蛋白胨聽聽聽聽聽聽聽聽聽 7g

葡萄糖聽聽聽聽聽聽聽聽聽 5g

磷酸氢二钾聽聽聽聽聽聽3.8g

水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 1000ml
( 2 )制法聽聽 取上述成分混合，微温使溶解，调pH值使灭菌后为7.3 士0.1 ，分装于小试管中，121 ℃ 灭菌15 分钟。
( 3 )用途聽聽 用于鉴别细菌的甲基红试验（M-R 反应）和乙酰甲基甲醇试验（V-P 反应）。
聽聽聽聽 1甲基红试验（M-R 反应）取可疑菌落或斜面培养物，接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，置35 ℃ 培养2 ～ 5 天，于培养管内加人甲基红指示液（称取甲基红0.1g，加95 ％乙醇300ml，使溶解后，加水至500ml）数滴，立即观察，呈鲜红色或橘红色为阳性，呈黄色为阴性。

2乙酰甲基甲醇生成试验（V-P 反应）聽聽 取可疑菌落或斜面培养物，接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，置35 ℃ 培养48 小时，量取2ml 培养液，加入α-萘酚乙醇试液（称取α－萘酚5g ，加无水乙醇溶解使成100ml ) 1ml , 混匀，再加40％氢氧化钾溶液0.4ml ，充分振摇，立刻或数分钟内出现红色，即为阳性反应；无红色反应为阴性，如为阴性反应，置35 ℃ 水浴4 小时后再观察。
4 ．蛋白胨水培养基
( l )成分

蛋白胨聽聽聽聽聽聽聽 10g

水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 l000ml

氯化钠聽聽聽聽聽聽聽聽聽5g
( 2 )制法聽 取上述成分混合，微温使溶解，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1 ，分装于小试管，121 ℃ 灭菌15 分钟。
( 3 )用途聽聽 用于鉴别细菌能否分解色氨酸而产生靛基质的生化反应。

① 靛基质试验取可疑菌落或斜面培养物，接种于蛋白胨水培养基中，置35 ℃ 培养24～48 小时，必要时培养4～5 天，沿管壁加人靛基质试液数滴，液面呈玫瑰红色为阳性，呈试剂本色为阴性。
聽聽聽聽聽聽 聽② 靛基质试液聽聽 称取对二甲氨基苯甲醛5g ，加入戊醇（或异戊醇）75ml ，充分振摇，使完全溶解后，再取盐酸25ml 徐徐滴入，边加边振摇，以免骤热导致溶液色泽变深．或称取对二甲氨基苯甲醛1g ，加人95 ％乙醇95ml ，充分振摇，使完全溶解后，再取盐酸20ml 徐徐滴入。
5 ．三糖铁琼脂培养基
( l ）成分

蛋白胨聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 20g

硫酸亚铁聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 0.2g

牛肉浸出粉聽聽聽聽聽聽聽聽聽 5g

硫代硫酸钠聽聽聽聽聽聽聽聽聽 0.2g

乳糖聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 10g

002％酚磺酞指示液聽聽聽12.5ml

蔗糖聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 10g

琼脂聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 12～15g

葡萄糖聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 1g

水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 1000ml

氯化钠聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽5g

聽( 2 )制法聽聽 除乳糖、蔗糖、葡萄糖、指示液、琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1 ，加入琼脂，加热溶胀后，再加入其余成分，摇匀，分装，121 ℃ 灭菌15 分钟，制成高底层（2 ～3cm ) 短斜面。
( 3 )用途聽 用于初步鉴别肠杆菌科细菌对糖类的发酵反应和产生硫化氢试验。

方法和结果观察：取可疑菌落或斜面培养物，做高层穿刺和斜面划线接种，置35 ℃ 培养24～ 48 小时，观察结果。培养基底层变黄色为葡萄糖发酵阳性，斜面层变黄色为乳糖、蔗糖发酵阳性；底层或整个培养基呈黑色表示产生硫化氢。
6.克氏双糖铁琼脂培养基
( l )成分

蛋白胨聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 20g

枸橼酸铁聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 0.3g

牛肉浸粉聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 3g

硫代硫酸钠聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽0.3g

酵母浸粉聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽3g

002 ％酚磺酞指示液聽 12 .5ml

乳糖聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 10g

琼脂聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽12～15g

葡萄糖聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 1g

水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽1000ml

氯化钠聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 5g
( 2 )制法聽聽 除乳糖、葡萄糖、指示液、琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1 , 加入琼脂，加热溶胀后，再加入其余成分，摇匀，分装，121 ℃ 灭菌15 分钟，制成高底层（2～ 3cm ）短斜面。
( 3 )用途聽 用于初步鉴别肠杆菌科细菌对糖类的发酵反应和产生硫化氢试验。

方法和结果观察：取可疑菌落或斜面培养物，做高层穿刺和斜面划线接种，置35 ℃ 培养24～ 48 小时，观察结果。培养基底层变黄色为葡萄糖发酵阳性，斜面层呈黄色为乳糖发酵阳性，斜面层呈红色为乳糖发酵阴性；底层或整个培养基呈黑色表示产生硫化氢。
7.脲（尿素）培养基
( 1 )成分

蛋白胨聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 1g

聽0.2 ％酚红溶液聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽6ml

葡萄糖聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 1g

20%无菌脲溶液聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽l00ml

氯化钠聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽5g

水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 1000ml

磷酸氢二钾聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽2g
( 2 )制法聽 除脲溶液外，取上述成分，混合，调pH 值使灭菌后为6.9 士0.1 ，混匀后，121 ℃ 灭菌15 分钟，冷至50 ～ 55 ℃ ，加人无菌脲溶液（经膜除菌过滤），混匀，分装于灭菌试管中。
( 3 )用途聽聽 用于鉴别细菌的尿素酶反应。

方法和结果观察：取可疑菌落或少量斜面培养物接种于培养基内，置35 ℃ 培养24 小时，观察结果。培养基变为红色为尿素酶反应阳性；不变色为阴性，阴性者需延长观察至1 周。
8 ．苯丙氨酸琼脂培养基
( 1 )成分

磷酸氢二钠聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽1g

氯化钠聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 5g

酵母浸膏聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽3g

琼脂聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 12 ～ 15g

DL-苯丙氨酸（DL - 聽phenylalanine )聽聽聽聽聽聽2g （或L-苯丙氨酸）( 1g )

水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽1000ml聽
( 2 )制法聽聽 除琼脂外，取各成分溶于水，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1 ，再加入琼脂，加热溶胀，分装试管，121 ℃ 灭菌15 分钟，制成长斜面。
( 3 )用途用于鉴别细菌的苯丙氨酸脱氨酶试验（也称苯丙酮酸试验）。

方法和结果观察：取斜面培养物，大量接种于苯丙氨酸琼脂斜面，置35℃培养4 小时或18～ 24 小时，取4～ 5 滴10 ％三氯化铁溶液试剂，由斜面上部流下，若出现墨绿色，即为苯丙氨酸脱氨酶试验阳性；倘若不变色则为阴性。
9.氨基酸脱羧酶试验培养基
( 1 ）成分

①聽聽聽 基础液

蛋白胨聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 5g

1.6聽聽聽 ％溴甲酚紫指示液聽聽聽聽聽聽聽 lml

酵母浸出粉聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 3g

水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 1000ml

葡萄糖聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽1g

② 氨基酸

L－赖氨酸聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 0.5g （需加碱溶液溶解）

L-鸟氨酸聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 0.5g（需加碱溶液溶解）

L-精氨酸聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 0.5g（不需加碱溶液溶解）

( 2 )制法聽 先配制基础液备用；将溶解后的3 种氨基酸，各分别加至100ml 基础液（使氨基酸的终浓度为0.5 % ) ，混匀，调pH 值使灭菌后为6.8 。分装于小试管中，每管2.5ml 并滴加1 层液体石蜡；同时分装一部分基础液于小试管，作为对照培养基，均置116 ℃ 灭菌10 分钟。
( 3 )用途聽 用于鉴别细菌的脱羧酶、双水解酶试验。
聽聽聽聽 方法和结果观察：取疑似菌斜面培养物分别接种于上述3 种培养基及基础液对照培养基，置35 ℃ 培养24 ～ 48 小时。在培养初期由于待检细菌发酵葡萄糖产酸，试验培养基和对照培养基应呈黄色，继续培养时，试验培养基如呈紫色或紫红色，即为阳性反应；如至培养末期，培养基仍同对照管呈黄色，则判为阴性反应。
10.明胶培养基
( l )成分

蛋白胨聽聽聽聽聽聽聽聽 5g

明胶聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 120g

牛肉浸出粉聽聽聽聽聽3g

水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 1000ml
( 2 )制法聽聽 取上述成分加人水中，浸泡约20 分钟，加热溶解，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1 ，分装于小试管中，121 ℃ 灭菌15 分钟。
( 3 )用途聽聽 用于细菌的明胶液化试验。

方法和结果观察：取少量待检菌斜面培养物穿刺接种于明胶培养基内，置35 ℃ 培养24 小时，取出置冰箱内10～ 聽20 分钟。如培养基仍呈溶液状，则为阳性； 培养基重新凝固，则为阴性。细菌液化明胶之作用有时甚为缓慢，如未见液化，需继续培养1 ～ 2 周方可确定阴性。
11 ．丙二酸钠培养基
( 1 )成分

酵母浸出粉聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 1g

磷酸二氢钾聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 0.4g

氯化钠聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽2g

丙二酸钠聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 3g

葡萄糖聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 0.25g

0.4 ％溴麝香草酚蓝指示液聽聽6ml

硫酸铵聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 2g

水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽l000ml

磷酸氢二钾聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 0.6g
( 2 ) 制法聽聽 除指示液外,将上述成分溶解，调pH 值使灭菌后为6.8 ，再加入指示液。分装小管中．121 ℃ 灭菌15分钟。
( 3 )用途聽 用于鉴别细菌能否利用丙二酸钠作为碳源而生长繁殖。
聽聽聽聽 方法和结果观察：取斜面或肉汤培养物接种于丙二酸钠培养基内，置35 ℃ 培养48 小时．于24 小时和48 小时后各观察1 次结果。培养基颜色由绿色变成蓝色为阳性反应；无颜色变化，或由绿色变成黄色，则为阴性反应。
12 .枸橼酸盐培养基
( 1 )成分

氯化钠聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 聽 5g

枸橼酸钠（无水）聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽2g

硫酸镁聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 0.2g

1.0 ％溴麝香草酚蓝指示液聽聽聽10ml

磷酸氢二钾聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 1g

琼脂聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 14g

磷酸二氢铵聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽1g

水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 l000ml
( 2 )制法聽 除指示液和琼脂外，取上述成分，混合，微温使溶解，调pH 值使灭菌后为6.9 士0.1 ，加入琼脂，加热溶胀，然后加入指示液，混匀，分装于小试管中，121 ℃ 灭菌15 分钟，制成斜面．
（3 ）用途聽 用于鉴别细菌能否利用枸橼酸盐作为碳源和氮源而生长繁殖。
聽聽聽聽方法和结果观察：取可疑菌落或斜面培养物，接种于枸橼酸盐培养基的斜面上，一般培养48 ～ 72 小时，凡能在培养基斜面生长出菌落，培养基即由绿色变成蓝色者为阳性反应；无菌落生长，培养基仍绿色者为阴性反应，阴性反应者应继续培养观察至7 天。
13．硝酸盐胨水培养基
（1）成分

蛋白胨聽聽聽聽聽聽聽 10g

硝酸钾聽聽聽聽聽聽聽聽2 g

酵母浸出粉聽聽聽聽3g

水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 1000ml
( 2 )制法聽 取上述成分，加热溶解，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1 ，分装于小试管中，121 ℃ 灭菌15 分钟。
( 3 )用途聽聽 用于鉴别细菌能否还原硝酸盐成亚硝酸盐。
聽聽聽聽方法和结果观察：取待检菌培养物接种于硝酸盐胨水培养基中，置35 ℃ 培养24 小时。将下列甲液和乙液于用前等量混合，每个培养物加混合物0.1 ml，产生红色为阳性反应，不产生红色为阴性反应。

甲液：称取α－萘胺5g，溶解于5mol / L 醋酸l000ml 中。

乙液：称取磺胺酸（对氨基苯磺酸）8g ，溶解于5mol / L 醋酸1000ml 中。
14 ．石蕊牛奶培养基
( l )成分

脱脂奶粉聽聽聽聽聽聽 10g

水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 100ml

10 ％石蕊溶液聽聽0.65ml
( 2 )制法聽聽 取上述成分混匀后，分装于小试管中．116 ℃ 灭菌10 分钟，
( 3 )用途聽聽 用于检查细菌对牛奶的凝固和发酵作用。
15.半固体营养琼脂培养基
( l )成分

蛋白胨聽聽聽聽聽聽聽 10g

琼脂聽聽聽聽聽聽聽聽聽 4g

牛肉浸出粉聽聽聽聽3g

水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 l000ml

氯化钠聽聽聽聽聽聽聽 5g
( 2 )制法除琼脂外，取上述成分，混合，微温使溶解，调pH 值使灭菌后为7.2 士0.2 ，再加入琼脂，加热溶胀，分装于小管中，121 ℃ 灭菌15 分钟后，直立放置。待凝固后备用
( 3 )用途聽 用于观察细菌的动力，也可用于一般菌种的保存。

细菌动力检查：取疑似菌斜面培养物穿刺接种于半固体营养琼脂培养基中，置35 ℃ 培养24小时，细菌沿穿刺外周扩散生长．为动力阳性；否则为阴性。阴性者，应再继续培养观察2 ～ 3 天。聽

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