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细菌检验工作的基本技术——嗜血杆菌属



录入时间:2010-7-14 9:24:34 来源:互联网

嗜血杆菌属
一、常规鉴定
聽聽聽 1.与相关菌属、种的鉴别:嗜血杆菌属常与放线菌属、艾肯菌属、心杆菌属、金氏菌属相鉴别,见下表。
表聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 嗜血杆菌属菌种与相关菌种鉴别试验
菌聽聽 种
X
V
嗜沫嗜血杆菌
+
-
-
-
-
+
+
+
-
+
-
副嗜沫嗜血杆菌
-
+
-
-
-
+
+
+
-
+
-
伴放线杆菌
-
-
-
-
-
+
-
-
D
+
+
侵蚀艾肯菌
-
-
-
+
+
-
-
-
-
+
-
人心脏杆菌
-
-
+
-
-
+
+
-
+
-
-
产靛基质金氏菌
-
-
+
-
-
+
+
-
-
-
-
嗜血红素嗜血杆菌
+
-
+
-
-
+
+
-
+
+
+
2.属内鉴别可利用分离培养时,对X、 V因子的需要和溶血性可初步区别不同的嗜血杆菌种。
聽聽聽 进一步的鉴别可通过生化试验来确定到种。流感嗜血杆菌发酵木糖,与埃及嗜血杆菌木糖不发酵相区别。杜克雷嗜血杆菌有特殊临床来源,所以较易诊断。属内种的鉴别见下表。
表聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 嗜血杆菌属中种的特征
嗜血杆菌
因子
β
溶血
发聽聽 酵
触酶
CO2促进生长
ONPGb
X
V
葡萄糖
蔗糖
乳糖
甘露糖
木糖
流感嗜血杆菌 a
+
+
-
聽聽 +
-
-
-
D
+
-
-
溶血嗜血杆菌
+
+
+
+
-
-
-
D
+
-
-
杜克雷嗜血杆菌
+
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
副流感嗜血杆菌
-
+
-
+
+
-
+
-
D
D
D
副溶血嗜血杆菌
-
+
+
+
+
-
-
-
+
-
-
迟缓嗜血杆菌
-
+
-
W
W
-
-
-
D
-
D
副嗜沫嗜血杆菌
-
+
-
+
+
+
+
D
-
+
+
嗜沫嗜血杆菌
-
-
-
+
+
+
+
-
-
+
+
注:a.包括埃及嗜血杆菌;D.不同结果;w.弱发酵反应
聽 聽聽聽聽 b.ONPG,O-硝基酚-β-D半乳糖吡喃苷。
聽聽聽
(1) 流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌的鉴定。
聽聽聽 用金黄色葡萄球菌作“卫星”试验阳性。但应注意“副流感”只需V因子即生长。可同时用M—H平板作卫星试验,能在M—H平板呈卫星生长的菌可否定流感嗜血杆菌。二者也可用糖发酵试验加以鉴别。
聽聽聽 (2) 作为院内感染病源追踪的流行病学的需要,对流感、副流感嗜血杆菌须鉴定到型。可用吲哚、尿素、鸟氨酸3个试验将“流感嗜血杆菌”分为8个生物型(详见表),或用血清学进行分型。
表聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 流感嗜血杆菌及副流感嗜血杆菌生物型鉴别
靛基质
尿 素
鸟氨酸脱羧
靛基质
尿 素
鸟氨酸脱羧
流感嗜血杆菌
副流感嗜血杆菌
+
+
+
-
-
+
+
+
-
-
+
+
Ⅲ a
-
+
-
-
+
-
-
+
+
+
+
+
+
-
+
+
-
+
-
-
+
+
+
-
+
-
-
+
-
-
-
-
-
聽注:a.埃及嗜血杆菌与流感嗜血杆菌Ⅲ生物型主要生化特性相似,二者区别参考有关资料。
二、试验方法
1.聽 卫星试验:挑取可疑菌落密涂划种于血平板上或M—H平板上,再将金黄色葡萄球菌点种或划种其上,35℃24h孵育。如葡萄球菌菌落邻近处被检菌的菌落较大,远离葡萄球菌菌落处的菌落小或不生长,即“卫星”试验阳性。在血平皿上划上葡萄球菌时,X,V因子都具备,在M-P,平板上接种葡萄球菌、只具备V因子。
2.聽 糖发酵试验
聽聽 培养基:1%糖的酚红肉汤,并补充所需生长因子,方法参考奈瑟菌鉴定。
3.聽 吲哚(快速法)试验:在pH 6.8的磷酸缓冲液(0.05mol)中,加0.1%的L-色氨酸。大量接种被检菌,孵育4h后,加Kovacs试剂。
4.聽 尿素酶试验
聽聽 培养基:
聽 聽聽聽 KH2PO4聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 0.1g
K2HPO4聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 0.1%
NaCl聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 0.5g
0.2%酚红水溶液聽聽聽 聽聽 0.5ml
蒸馏水聽聽聽 聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 100ml

pH 7.0高压后加20%的尿素溶液 10.4ml。
方法:与其他菌相同。注意接种量要大,4小时观察结果。

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