聽聽聽 3．3％盐酸酒精；
染色的第一步是制作涂片。菌液涂片时，用接种环沾取菌液点在载玻片上，标本可直接在玻片上涂布。菌落涂片时，先取生理盐水 1滴，置玻片上，用接种针挑取菌落，在盐水中涂布。涂片时必须注意应轻轻操作。猛烈的动作会改变菌细胞原有的排列形式，或造成细菌鞭毛脱落，影响结果的准确性。制备的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定温度不宜过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细胞形态改变。将固定后的涂片进行染色。
聽
一、革兰染色
本染色是最基本的染色法，可用于标本涂片或菌落涂片。染色结果将细菌分为革兰阳性(紫色)和革兰阴性(红色)两类。
试剂
1. 结晶紫溶液
聽 聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 A液：聽聽聽 结晶紫聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 2g
聽聽聽 聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 95％乙醇聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 20ml
聽聽聽 聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 B液：聽聽聽 草酸铵聽聽聽 聽聽聽 0.8g
聽聽聽 聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 蒸馏水聽聽聽 聽聽聽 80ml
聽聽聽 需在用前24h将A液、B液混合，过滤后装入试剂瓶内备用。
2．碘液
碘聽聽聽 聽聽聽聽聽聽聽聽聽 1g
碘化钾聽聽聽 聽聽 2g
蒸馏水聽聽聽 聽聽 300ml
碘与碘化钾混合并研磨，加入几毫升水，使其逐渐溶解，然后研磨，继续加入少量蒸馏水至完全溶解。最后补足水量。
也可用少量蒸馏水，先将碘化钾完全溶解，再加入碘片，待完全溶解后，加水至300ml。
3．脱色液：95％乙醇。
4．复染液
聽 聽聽聽 A. 贮存液：聽 沙黄聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 2.5g
聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 95％乙醇聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 100ml
聽 聽聽聽 B. 应用液：聽 A液聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 10ml
聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 蒸馏水聽聽聽聽聽聽聽聽聽 90ml
聽
染色方法：
1．涂片经火焰固定，加结晶紫液染1 min，清水冲去染液。
聽 聽聽聽 2．加碘液染l min，水洗。
聽 聽聽聽 3．加脱色液，不时摇动约10～30s，至无紫色脱落为止，水洗。
聽 聽聽聽 4．加复染液，染30s，水洗。
聽 聽聽聽 5．干后镜检。
聽
二、抗酸染色
抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率。染厚涂片时，须掌握复染色时间。如果背景过深，影响镜检。
奴卡菌及放线菌可呈弱抗酸性，取培养菌落涂片染色时，呈现两种现象，视野中有些菌细胞阳性，另外一些则阴性；有时同一个菌体上，红色的深浅亦有不同，观察时应予注意。
抗酸染色有两种常用方法：① 碱性复红法又称萋纳(Ziehl—Neelsen)法。 ② 荧光染料金胺O法(也称金胺O-罗丹明B法)。
(一)聽 碱性复红染色法
试 剂
1．萋纳石炭酸复红溶液
聽 聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 碱性复红乙醇饱和溶液聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 10ml
聽 聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 5％石炭酸溶液聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 90ml
2．脱色剂 *
聽 聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 浓盐酸聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 3ml
聽 聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 95％乙醇聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 97ml
3．复染液(吕弗勒美蓝液)
美蓝乙醇饱和溶液聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 30ml
10％氢氧化钾聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 0.1ml
蒸馏水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 100ml
染色方法
1．涂片经火焰固定，加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸汽出现，切不可沸腾。染5 min(若染色奴卡菌需要加长时间)，水洗。
聽聽聽 2．加脱色剂，不时摇动玻片至无红色脱落为止，水洗。
聽聽聽 3．加复染液，染0.5～l min，
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