聽
1聽 介绍
浓缩果汁中有时含有导致腐败的芽孢菌，耐酸耐热菌，也叫TAB，它们的特点是：
1）聽 能耐热的孢子；
2）聽 能耐果汁中的酸；
3）聽 能在含有很少量的氧中生长；
这个程序描述了检验浓缩苹果清汁（比如苹果）的TAB的检验方法。
2聽聽 设备和试剂
2.1聽 设备
2.1.1聽 三角瓶：1000ml。
2.1.2聽 灭菌的99ml的去离子水的稀释空白。
2.1.3聽 磁力搅拌棒。
2.1.4聽 带有搅拌器的加热盘。
2.1.5聽 塑料注射器：10ml。
2.1.6聽 注射用的滤膜装置(0.45um)。
2.1.7聽 灭菌培养皿：90mm。
2.1.8聽 恒温水浴锅：74-76°C。
2.1.9聽 恒温培养箱：43±1℃。
2.1.10 广口灭菌吸管：25ml。
2.1.11 一次性的带有螺旋盖子的试管。
2.1.12 可以无菌过滤0.45um的过滤装置。
2.1.13 异丙基酒精。
2.2聽聽 试剂
2.2.1 酵母粉(VWR DF0127-15)
2.2.2 蛋白胨(VWR DF0118-15)
2.2.3 琼脂粉(VWR DF0145-17)
2.2.4 葡萄糖(VWR EM-DX0145-11)
2.2.5 吐温80(VWR JTX 257-7)
2.2.6 苹果酸(VWR JTP494-7)
3聽聽 操作步骤
3.1 配制K氏培养基，在一个1升的烧瓶中，加入：
3.1.1 去离子水：500-mL
3.1.2 酵母粉： 1.25-g
3.1.3 蛋白胨： 2.50-g
3.1.4 琼脂粉： 7.50-g
3.1.5 葡萄糖： 0.50-g
3.1.6 吐温80：0.50-mL
3.1.7 磁力搅拌装置
或者直接购买K氏培养基，按照厂家的说明配制。
3.2聽 加热使药品充分溶解。
3.3聽 轻轻的盖上烧瓶的塞子，将培养基在15磅下高压灭菌25分钟。
3.4聽 在一个小烧杯中加入1.0克的苹果酸和10 ml去离子水，搅拌使其溶解。
3.5聽 将苹果酸的溶液抽入10ml的一次性塑料注射器中。
3.6聽 在塑料注射器的末端进行无菌的滤膜过滤。
3.7聽 K氏培养基灭菌结束后，将苹果酸的溶液用注射器无菌的滤膜过滤到K氏培养基中，充分摇匀。
3.8聽聽 聽当培养基冷却到大约50°C时，将酸化后的培养基倒入到一次性培养皿中。
3.9聽聽 聽等待培养基凝固后，在≤5°C的条件下冷藏，可以保存60天。
3.2聽 采样
3.2.1 样品不必采取无菌的方式采集，但是要防止和其他样品的交叉污染。
3.2.2 采样的容器必须是灭菌的。
3.2.3 取样时，从大桶中取样出来所用的器具应先用水清洗，然后在200ppm的有效氯中浸泡后，才可以浸入大桶中取样。
3.3 热冲击
3.3.1 调节水浴锅到74-76°C。
3.3.2 用一个广口吸管吸取1ml样品于带有盖子的试管中，准备测试。
3.3.3 加入10ml灭菌水。
3.3.4 紧紧的盖上试管的盖子。
3.3.5 将此样品放到水浴锅中，用计时器计时13分钟。
4聽 数据分析
4.1聽 将热冲击后的样品加入到99ml的灭菌水空白中，充分混匀。
4.2聽 用一次性的0.45um的滤膜过滤稀释液。
4.3聽 移开过滤器的上部。聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽
4.4聽 将镊子的尖端在酒精中浸后，点燃灭菌。
4.5聽 用这个灭菌的镊子将滤膜夹到K氏培养基上。
4.5聽 轻敲滤膜使它紧贴到K氏培养基上。
4.6聽 盖上培养皿的盖子，把培养皿包起来，以减少培养基的干燥。
4.7聽 在培养箱底部的架子上放一盘去离子水，以保证培养箱内潮湿防止培养基干裂。
4.8聽 放置培养皿时，将培养皿的盖子朝下。
4.9聽 在43°C 下培养 5天，记录滤膜上的菌落数，它们是1ml的浓缩果汁样品的TAB数目。
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参考资料：Coca Cola公司耐热耐酸菌的检测。
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