1、仪器和试剂
（1）生化培养箱：36±1℃
（2）高压蒸汽灭菌锅
（3）恒温水浴锅：46±1℃
（4）天平
（5）电炉
（6）吸管：1ml和10ml，标有0.1ml单位的刻度
（7）三角烧瓶：容量为250ml、500ml
（8）平皿：皿底直径为9cm
（9）试管：15×150mm
（10）酒精灯
（11）试管架、试管框
（12）灭菌刀或剪刀、灭菌镊子
（13）酒精棉球
（14）记号笔
（15）白瓷缸（用于煮开水）
（16）温度计：0-100℃
（17）营养琼脂培养基：购买制好的营养琼脂，按说明分装于300ml三角瓶中，高压灭菌121℃、15分钟。
（18）生理盐水：8.5gNaCl溶于1000ml蒸馏水中，高压灭菌121℃、15分钟。
2、方法
（1）用10ml灭菌吸管吸取5ml奶样加入灭菌试管中。
（2）在另一支试管加入与奶样等量的水。
（3）在装水的试管中插一支温度计。
（4）将装有奶样和水的试管同时放入沸水浴中（在电炉上用白瓷缸把水煮沸，并保持沸腾）。
（5）直至“装水试管”的温度达到100℃，计时10分钟(如果水不到100℃就沸腾，则等候时间延长；或在水中加入盐以提供高沸点温度，但要避免奶样沸腾)。
（6）10分钟后，取出试管，用冷水冲，使含奶样的试管冷却。
（7）用1ml灭菌吸管分别吸1ml冷却后的奶样于两个灭菌平皿中。
（8）及时将冷却至46℃的营养琼脂注入平皿约15ml，并转动平皿使之混匀；同时将营养琼脂分别注入加有1ml灭菌生理盐水的平皿和另一个灭菌的空白平皿内，做空白对照。
（9）待营养琼脂凝固后，翻转平板。置于55±1℃的培养箱内培养48-72h，取出计数。
3、计数
同菌落总数测定的计数方法。
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