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    出口食品中霍乱弧菌检验方法



    录入时间:2009-2-17 13:13:23 来源:青岛海博论坛论坛生物

    一、培养基明细:
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    碱性蛋白胨水(APW)聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽250g聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽70
    TCBS琼脂聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽250g聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽95
    三糖铁琼脂(TSI)聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽250g聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽85
    双糖铁琼脂(KIA)聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽250g聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽85
    T1N1琼脂聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽250g聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽85
    精氨酸葡萄糖斜面琼脂(AGS)聽聽聽100g聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽385
    Hugh-Leifson葡萄糖肉汤(HLGB)聽聽*聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽*
    MR-VP肉汤聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽20支聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽15
    ONPG胨水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽20支聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽35
    Andrade氏糖类肉汤聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽250g聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽80
    Andrade氏指示剂聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽100ml聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽50
    氧化酶试剂聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽1g聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽50聽聽
    粘丝试验溶液聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽*聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽*
    革兰氏染色液聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽5ml*8聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽40
    5%红细胞生理盐水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽*聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽*
    50万单位多黏菌素B纸片聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽*聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽*
    10ug和150ugO/129纸片聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽*聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽*
    霍乱弧菌诊断血清(O1群)聽聽聽聽聽聽聽1ml*12聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽480
    霍乱弧菌诊断血清(O139群)聽聽聽聽聽聽1ml聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽50
    二、备注:
    1、依据SN/T聽1022—2001出口食品中霍乱弧菌检验方法聽适用于出口水产品及其它食品的检验。
    2、术语:
    聽聽聽霍乱弧菌:为革兰氏阴性菌,菌体弯曲呈弧状或逗点状,菌体一端有单根鞭毛和菌毛,无荚膜与芽胞。经人工培养后,易失去弧形而呈杆状。细菌运动极为活泼,呈流星穿梭运动。营养要求不高,在PH8.8~9.0的碱性蛋白胨水或平板中生长良好。因其他细菌在这一PH不易生长,故碱性蛋白胨水可作为选择性增殖霍乱弧菌的培养基。在碱性平板上菌落直径为2mm,圆形,光滑,透明。 
    聽 霍乱弧菌能还原硝酸盐为亚硝酸盐,靛基质反应阳性,当培养在含硝酸盐及色氨酸的培养基中,产生靛基质与亚硝酸盐,在浓硫酸存在时,生成红色,称为霍乱红反应,但其他非致病性弧菌亦有此反应,故不能凭此鉴定霍乱弧菌。EL聽Tor型霍乱弧菌与古典型霍乱弧菌生化反应有所不同。前者Vp阳性而后者为阴性。前者能产生强烈的溶血素,溶解羊红细胞,在血平板上生长的菌落周围出现明显的透明溶血环,古典型霍乱弧菌则不溶解羊红细胞。个别EL聽Tor型霍乱弧菌株亦不溶血。根据弧菌O抗原不同,分成Ⅵ个血清群,第Ⅰ群包括霍乱弧菌的两个生物型。第Ⅰ群A、B、C三种抗原成份可将霍乱弧菌分为三个血清型:含AC者为原型(又称稻叶型),含AB者为异型(又称小川型),A、B、C均有者称中间型(彦岛型)。霍乱弧菌对热,干燥,日光,化学消毒剂和酸均很敏感,耐低温,耐碱。湿热55℃,15分钟,100℃,1~2分钟,水中加0.5ppm氯15分钟可被杀死。0.1%高锰酸钾浸泡蔬菜、水果可达到消毒目的。在正常胃酸中仅生存4分钟。
    3、粘丝试验溶液:溶解0.5g去氧胆酸钠于100ml水中,拧紧瓶盖保存于冰箱中,无需高压灭菌。霍乱弧菌在钙溶液中被乳化后,1min内形成粘液状团块。当粘块从玻片上被拉出2cm—3cm时呈粘丝。
    4、Hugh-Leifson葡萄糖肉汤(HLGB):
    配方:
    蛋白胨聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽2.0g
    酵母浸粉聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽0.5g
    氯化钠聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽30.0g
    葡萄糖聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽10.0g
    溴甲酚紫聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽0.015g
    琼脂聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽3.0g
    蒸馏水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽1000ml
    制法:将各成分(溴甲酚紫除外)加入蒸馏水中,充分混匀,搅拌加热溶解调节pH7.4,加入溴甲酚紫,混匀,分装于15mm*150mm试管的1/3容量,121℃高压灭菌15min。接种后覆盖约1ml灭菌矿物油以检查葡萄糖发酵。聽聽聽
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