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    出口畜产品中炭疽杆菌检验方法——3



    录入时间:2008-12-18 15:41:04 来源:青岛海博论坛论坛生物

    A5聽洗样液
    吐温-20聽2.5mL
    蒸馏水聽1聽000mL
    将吐温-20加于蒸馏水中,充分搅匀,分装于三角烧瓶或试剂瓶内,121℃高压灭菌。贮存于聽0~4℃冰箱,备用。
    A6聽生理盐水
    氯化钠聽8.5g
    蒸馏水聽1000.00mL
    待氯化钠完全溶解后,分装于三角烧瓶或试剂瓶内,121℃高压灭菌聽20min。
    A7聽缓冲生理盐水
    无水磷酸氢二钠聽1.42聽g
    氯化钠聽8.50聽g
    蒸馏水聽1聽000.00聽mL
    将各成分加于蒸馏水中,加热搅拌使完全溶解。如欲长期保存,可加聽0.1g硫柳汞(最终浓度为聽0.01%)。
    A8聽固定液
    无水乙醇聽600聽mL
    三氯甲烷聽300聽mL
    甲醛溶液(36%~38%)聽100聽mL
    将三种成分混匀,贮存于磨砂口带盖试剂瓶内。
    A9聽炭疽杆菌噬菌体γ或聽ω型的均可使用。
    A10聽革兰氏染色液及染色方法
    A10.1聽Hucker聽氏结晶紫液
    A液:结晶紫(或龙胆紫)聽2.0g聽
    聽聽聽聽聽乙醇(95%)聽20.0mL
    B液:草酸铵聽0.8g
    聽聽聽聽聽蒸馏水聽80.0聽mL
    将聽A、B两液混匀,放置聽24聽h后,用粗滤纸过滤。贮于磨砂口滴瓶内。聽
    A10.2聽革兰氏碘液碘聽1.0聽g碘化钾聽2.0聽g蒸馏水聽300.0聽mL聽将碘和碘化钾放于乳钵内,研成细粉。先后分三次分别加蒸馏水1mL聽、5mL和10聽mL,继续研磨至完全溶解,倒入褐色瓶中。再加水将残留于乳钵的碘液洗入瓶中,补加蒸馏水至300mL。
    A10.3聽脱色剂95%乙醇聽适量贮于磨砂口滴瓶中。
    A10.4聽Hucker氏复染液(贮备液)沙黄聽O聽2.5聽g乙醇(95%)聽100mL临用时,取适量贮备液,加蒸馏水稀释成聽1:10稀释液。
    A10.5聽染色方法
    a.聽于载玻片上制备涂膜,自然干燥;
    b.聽将玻片浸入固定液内,固定聽1聽min;
    c.聽加结晶紫于涂膜上,染色聽1聽min;
    d.聽用水冲去染色液,淋去多余的水;聽
    e.聽加革兰氏碘液于涂膜上,媒染聽1聽min;
    f.聽用水冲去碘液;
    g.聽连续加聽95%乙醇流过涂膜,至无紫色脱掉;
    h.聽用水冲洗玻片,淋去多余的水;
    i.聽加复染液于涂膜上,染色聽10~30聽s;
    j.聽用水冲去染色液;
    k.聽用吸墨纸吸干水分或自然干燥;
    l.聽镜检。
    A11聽大豆凝集素稀释液按试剂使用说明制备工作稀释液,贮于聽4℃冰箱备用。
    附加说明:本标准由中华人民共和国进出口商品检验局提出。本标准由中华人民共和国内蒙古进出口商品检验局负责起草。本标准主要起草人甄宏太、周云霞
    中华人民共和国国家进出口商品检验局聽1994-12-26批准聽1995-05-01实施聽聽聽
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