2.3酶底物法2.3.1范围本标准规定了用酶底物法测定生活饮用水及其水源水中的总大肠菌群。本法适用于生活饮用水及其水源水中总大肠菌群的检测。本法可在24h判断水样中是否含有总大肠菌群及含有的总大肠菌群的最可能数（MPN）。本法可同时检测大肠埃希氏菌，见大肠埃希氏菌检测（4.3）。2.3.2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2.3.2.1聽聽总大肠菌群酶底物法enzym聽:聽sub聽,聽trate聽technique聽for聽total聽coliforms聽聽总大肠菌群酶底物法是指在选择性培养基上能产生价半乳糖昔酶的细菌群组，该细菌群组能分解色原底物释放出色原体使培养基呈现颜色变化，以此技术来检测水中总大肠菌群的方法
2.3.3培养基与试荆2.3.3.1培养基聽在本标准中酶底物法采用固定底物技术，本方法采用(聽MMO一MUG）培养基，可选用市售商品化制品。每1000mlMMO一MUG培养基所含基本成分为：聽A硫酸铵聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽5.0g聽B硫酸锰聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽0.5聽rng聽C硫酸锌聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽0.5聽mg聽D硫酸镁聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽100聽mg聽E氯化钠聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽10g聽F氯化钙聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽50mg聽G亚硫酸钠聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽40mg聽H两性霉素B聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽1mg聽1邻硝基苯件-β-D-毗喃半乳糖普（ONPG聽)聽聽聽聽聽500mg聽J4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸普（MUG聽)聽聽聽聽75mg聽K茄属植物萃取物（solanium萃取物）聽聽聽聽聽聽聽500mg聽L聽N-2-乙基呱嗓NZ乙磺酸钠盐（HEPES钠盐）聽5.3g聽M聽N-2-乙纂呱嗦NZ乙磺酸（HEPEs聽)聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽6.9g聽2.3.3.2生理盐水聽聽聽聽8.5g/l的生理盐水，用于稀释样品成分：
氯化钠聽聽聽聽8.5g蒸馏水加至1000mL聽聽聽溶解后．分装到稀释瓶内，每瓶90mL聽,聽103.43kPa聽(聽121℃,聽15lb)聽20min高压灭菌
2.3.4仪器设备2.3.4.1量筒：100ml、500ml、l000ml。2.3.4.2吸管：lml、5ml及10ml的无菌玻璃吸管或塑料一次性吸管2.3.4.3稀释瓶：100ml、250ml、500mL及1O00ml能耐高压的灭菌玻璃瓶2.3.4.4试管：可高压灭菌的玻璃或塑料试管，大小约15mm*10cm。2.3.4.5培养箱：36℃聽士1℃聽。2.3.4.6高压蒸汽灭菌器。2.3.4.7于热灭菌器（烤箱）。2.3.4.8定量盘：定量培养用无菌塑料盘，含51个孔穴，每一孔穴可容纳2ml水样。
2.3.4.9程控定量封口机：用于51孔或97孔法（MPN法，最可能数法）定量盘的封口。
2.3.5检验步骤2.3.5.1水样稀释聽聽聽聽检测所需水样为100mL若水样污染严重，可对水样进行稀释。取10mL水样加人到90ml灭菌生理盐水中，必要时可加大稀释度。2.3.5.2定性反应聽聽用100ml的无菌稀释瓶量取100mL水样，加入2.7g士0.5gMMO—MUG培养基粉末，混摇均匀使之完全溶解后，放人36℃士1℃聽的培养箱内培养24h。2.3.5.3聽10管法2.3.5.3.1用100ml的无菌稀释瓶量取100mL水样，加人2.79士0.5gMMO—MUG培养基粉末，混摇均匀使之完全溶解2.3.5.3.2准备10支15mm*10cm或适当大小的灭菌试管，用无菌吸管分别从前述稀释瓶中吸取10ml水样至各试管中，放人36℃聽士1℃聽的培养箱中培养24h。2.3.5.4聽聽51孔定量盘法2.3.5.4.1用100ml的无菌稀释瓶量取100mL水样，加人2.7g士0.5gMMO一MUG培养基粉末，混摇均匀使之完全溶解。2.3.5.4.2将前述100聽ml水样全部倒人51孔无菌定量盘内，以手抚平定量盘背面以赶除孔穴内气泡，然后用程控定量封口机封口。放入36℃士1℃聽的培养箱中培养24h。
2.3.6结果报告2.3.6.1结果判读聽聽聽将水样培养24h后进行结果判读，如果结果为可疑阳性，可延长培养时间到28h进行结果判读，超过28h之后出现的颜色反应不作为阳性结果。2.3.6.2定性反应聽聽聽水样经24h培养之后如果颜色变成黄色，判断为阳性反应，表示水中含有总大肠菌群。水样颜色未发生变化，判断为阴性反应定性反应结果以总大肠菌群检出或未检出报告2.3.6.3聽聽聽10管法2.3.6.3.1将培养24h之后的试管取出观察，如果试管内水样变成黄色则表示该试管含有总大肠菌群。2.3.6.3.2计算有黄色反应的试管数，对照表4查出其代表的总大肠菌群最可能数（MPN）。结果以MPN/100聽mL表示。如所有管未产生黄色，则可报告为总大肠菌群未检出。
2.3.6.4聽聽51孔定量盘法2.3.6.4.1将培养24h之后的定量盘取出观察，如果孔穴内的水样变成黄色则表示该孔穴中含有总大肠菌群。
2.3.6.4.2计算有黄色反应的孔穴数，对照表5查出其代表的总大肠菌群最可能数（MPN）。结果以ml表示。如所有孔未产生黄色，则可报告为总大肠菌群未检出。聽聽聽
聽聽聽

聽

上一篇：中华人民共和国国家标准 生活饮用水标准检验方法微生物指标——2，2

下一篇：中华人民共和国国家标准 生活饮用水标准检验方法微生物指标——2，4