一、培养基的应用

聽 GMP生产车间进行沉降菌检测时，有些环境下会残留抗生素类抑菌成分，污染至测沉降菌的平板上，对沉降菌的生长产生抑制效果，导致监测结果不准确。因此，对此类环境沉降菌进行监测时，通常使用加入相应的酶类TSA平板，以消除残留的抗生素的影响。

二、验证方法

聽 进行方法验证之前，首先要确认沉降菌的每皿抗生素残留量最大值为多少，验证时可按照此最大值的120%浓度进行测试。

聽 例：某车间测定沉降菌时，9cm平皿测试沉降菌时，残留的青霉素最大量为0.5mg/皿，现有含青霉素酶的TSA平皿（每皿含青霉素酶2万单位），测定此平皿是否能消除残留的青霉素的影响。

聽 试验方法：

聽 （1）选用金黄色葡萄球菌为测试菌株，活化后用生理盐水梯度稀释至适宜浓度；

聽 （2）将青霉素的标准样品稀释至适宜浓度，过滤除菌；

聽 （3）制成编号1和2含金黄色葡萄球菌浓度相同的菌悬液（含菌量为10-100CFU/mL），2号菌悬液同时含青霉素6mg/mL；

聽 （4）准备4组平板，1组为正常的TSA平板（对照组），涂布编号1的菌液0.1mL，2组为正常的TSA平板，涂布编号2的菌液0.1mL，3组为含酶的TSA平板，涂布编号1的菌液0.1mL，4组为含酶的TSA平板，涂布编号2的菌液0.1mL，将接种后的平板置35℃培养24-48h，计数。

试验组1（左）菌数为39CFU，实验组2（右）无菌生长

试验组3（左）菌数为38CFU，实验组4（右）菌数为32CFU

聽 结果分析：

聽 1组生长良好，2组无菌生长，说明加入的抗生素是有效的，3组与1组相比，菌数一致，说明含酶的培养基本身是合格的，没有抑菌性，4组与1组相比，菌数基本一致（比值在0.5-2之间），说明培养基中的酶可消除0.6mg/皿的青霉素的抑菌效果。

聽 试验其他结果分析及改进：

聽 （1）若试验组2出现部分菌落生长，说明抗生素抑菌效果不高或者该菌对此抗生素效果不够敏感，可以扩大测试菌株范围或使用敏感菌株；

聽 （2）若试验组3的菌数比试验组1明显偏少，可能培养基的质量存在问题。在确认培养基的质量没有问题的情况下，试验组1和3只做一组即可做为对照；

聽 （3）若试验4组菌数明显偏少或不生长，说明培养基并没有消除抗生素的抑制效果，需加大酶的用量或选用其他合适的酶进行测试。

注:本文属海博论坛论坛生物原创,未经允许不得转载。

聽

上一篇：大肠杆菌、大肠菌群、粪大肠菌群的定义与区分

下一篇：两种β-半乳糖苷酶的测定方法