聽聽聽
聽聽聽用于酵母繁殖和筛选的培养基
　
聽
注意：有关标记符号的材料的恰如其分的操作见附录12。
重要：在所有配方中使用蒸馏去离子水。除非另有说明，培养基和溶液在15聽psi(1.05kg／cm2)高压下蒸汽灭菌15-20min。
聽
完全基本培养基（CM）或合成完全培养基（SC）和营养缺陷型培养基
为了确定菌株生长的必需条件，采用相应的营养缺陷型培养基是非常有用的。培养基补料的干粉是各自分开保存的，可以方便地配制相应的营养缺陷型培养基。CM(或SC)是含有所有生长成分的培养基(也就是说，没有一种营养成分缺陷)。
无氨基酸酵母氮源（市售的无氨基酸酵母氨源(YNB)分含硫酸胺和不含硫酸胺两种。此配方所用YNB系含硫酸胺的。如果你手头的YNB不含硫酸胺，则只加1.7g聽YNB，另加5g硫酸胺即可。）聽聽聽聽6.7g
葡萄糖聽聽聽聽20g
琼脂粉聽聽聽聽20g
营养缺陷混合物聽聽聽聽2g
H2O聽聽聽聽to聽1000聽ml
聽
营养缺陷混合物(Drop-out聽Mix)
减去有关的补料，聽聽混合适当的成分，在密封的容器中混合。来回倒置转动容器至少15聽min；加入几粒干净的大理石，以助于固体的混合。
腺嘌呤(Adenine)聽聽聽聽0.5g
丙氨酸(Alanine)聽聽聽聽2.0g
精氨酸(ArSinine)聽聽聽聽2.0g
天冬酰胺(Asparagine)聽聽聽聽2.0g
天冬氨酸(AsPanic聽acid)聽聽聽聽2.0g聽聽聽聽
半胱氨酸(Cysteine)聽聽聽聽2.0g
谷氨酰胺(Glatamine)聽聽聽聽2.0g
谷氨酸(Glutsmic聽acid)聽聽聽聽2.0g
甘氨酸(GIycine)聽聽聽聽2.0g
组氨组(Histidine)聽聽聽聽2.0g
肌醇(Inositol)聽聽聽聽2.0g
异亮氨酸(Isoleucine)聽聽聽聽2.0g
亮氨酸(Leudne)聽聽聽聽10.0g
赖氨酸(Lysine)聽聽聽聽聽聽聽聽2.0g
甲硫氨酸(Methionine)聽聽聽聽2.0g
对氨基苯甲酸(para-Aminobenzoic聽acid)聽聽0.2g
苯丙氨酸(Phenylalanine)聽聽聽聽2.0g
脯氨酸(Proline)聽聽聽聽2.0g
丝氨酸(Serine)聽聽聽聽2.0g
苏氨酸(Threonine)聽聽聽聽2.0g
色氨酸(Tryptophan)聽聽聽聽2.0g
酪氨酸(Tyrosine)聽聽聽聽2.0g
尿嘧啶(Uracil)聽聽聽聽2.0g
缬氨酸(Valine)聽聽聽聽2.0g
摘录于Adams等人(1998)的资料。
聽
聽聽聽聽表A2.3聽聽补加基本培养基的成分
成分
聽贮存液浓度／(g／100ml)
聽1L中所加贮存培养基的体积／ml
聽培养基中最终浓度／(mg／L)
聽涂布在乎板上所需贮存液的体积／ml
聽
腺嘌呤硫酸盐
聽0.2a
聽10
聽20
聽0.2
聽
尿嘧啶
聽0.2a
聽10
聽20
聽0.2
聽
L—色氨酸
聽1
聽2
聽20
聽0.1
聽
l—组氨酸HCl
聽1
聽2
聽20
聽0.1
聽
L—精氨酸LiCl
聽1
聽2
聽20
聽0.1
聽
L—甲硫氨酸
聽1
聽2
聽20
聽0.1
聽
L—酪氨酸
聽0.2
聽15
聽30
聽0.2
聽
L—亮氨酸
聽1
聽10
聽109
聽0.1
聽
L—异亮氨酸
聽1
聽3
聽30
聽0.1
聽
L—赖氨酸HCl
聽1
聽3
聽30
聽0.1
聽
L—苯丙氨酸
聽1a
聽5
聽50
聽0.1
聽
L—谷氨酸
聽1a
聽10
聽100
聽0.2
聽
L—天冬氨酸
聽1a,b
聽10
聽100
聽0.2
聽
L—缬氨酸
聽3
聽5
聽150
聽0.1
聽
L—苏氨酸
聽4a,b
聽5
聽200
聽0.1
聽
L—丝氨酸
聽8
聽5
聽400
聽0.1
聽
注：a:室温保存；b:培养基高压灭菌后再加入。
聽
补加的基本培养基(SMM)
SMM是加入各种生长补料的合成葡萄糖基本培养基(SD)。这些溶液可长期存放。某些溶液应在室温保存以防发生沉淀，而其他的溶液可能需要冷冻。无论如何，应优先选用氨基酸的盐酸盐。聽
将适当体积的贮存液加到SD培养基的配料中以配制培养基，而后用蒸馏水调节终体积至1L。高压灭菌后分别加苏氨酸和天冬氨酸溶液。
通常方便的配制SMM培养基的替代办法是，将少量补料涂布在SD平板的表面。补料液在平板上完全干燥后再接种酵母菌。
表A2-3给出了贮存液的浓度，配制1L培养基所需的贮存液的体积，涂在SD平板上所需贮存液的体积以及在SMM中每种成分的最终浓度。
合成的葡萄糖基本培养基（SD）
SD是含有盐类、微量元素、维生素、氮源(不含氨基酸的酵母氮碱)和葡萄糖的合成基本培养基。
不含氨基酸酵母氮源（见CM配方说明）聽聽聽聽6.7g
葡萄糖聽聽聽聽20g
细菌培养用琼脂聽聽聽聽20g
加水聽聽聽聽~1000ml
用于酵母的X-gal指示平板
因为在SD培养基的正常酸性pH条件下，5—溴—4—氯—3—吲哚—p—D—半乳糖苷(X—gal)对酵母菌不起作用，故使用中性pH的培养基。这种选择完全是一种权宜之计。因为许多酵母菌株在中性pH时生长不好。为配制每升X-gal指示平板，需制备下述溶液。
溶液I
10×磷酸缓冲液贮存液聽聽聽聽100ml
1000×无机盐贮存液(见下面配方)聽聽聽聽1ml
drop-out混合物(见上述)聽聽聽聽2g
如果培养基中含有葡萄糖，用蒸馏水调节体积至450ml；若培养基中含有半乳糖，用蒸馏水调节体积400聽ml。
l0×磷酸缓冲液贮存液
KH2PO4(1聽mol／L)聽聽聽聽136.1聽g
聽(NH4)2SO4(0.15聽mol几)聽聽聽聽19.8聽g
KOH(0.75mol／L)(!)聽聽聽聽42.1聽g
加水至1聽000ml
调pH值至7.0并高压灭菌。
1000×无机盐贮存液
FeCl3(2mmol／L)聽聽聽聽32mg
MgSO4·7H2O(0.8聽mol／L)聽聽聽聽19.72g聽聽聽聽
加水至100ml
高压灭菌并贮存备用。这种溶液会出现细小的黄色沉淀，用前应重新悬浮。
聽
溶液Ⅱ
在一个2L的烧瓶中混合：
细菌培养用琼脂聽聽聽聽20g
蒸馏去离子水聽聽聽聽500ml
·溶液I和溶液Ⅱ分开高压。
·冷却至65℃以下时将下述成分加到溶液I中：
聽聽聽聽葡萄糖或其他糖类加至终浓度为2％
聽聽聽聽X-gal(20mg／ml，聽聽用二甲基甲酰胺溶解)聽聽2ml
聽聽聽聽100×维生素贮存液聽聽聽聽10ml
.这时包含任何其他的热敏感补料。
.将溶液I和溶液Ⅱ混合在一起，每个平板铺30ml左右。
聽聽聽聽100×维生素贮存液
聽聽聽聽维生素B1(硫胺素)(0.04聽mg／m1)聽聽聽聽4聽mg
聽聽聽聽生物素(2／ug／ml)聽聽聽聽0.2mg
聽聽聽聽维生素B6(0.04聽mg／ml)聽聽聽聽4mg
聽聽聽聽肌醇(0.2mg／ml)聽聽聽聽20mg
聽聽聽聽维生素B3(泛酸)(0.04mg／ml)聽聽聽聽4mg
聽聽聽聽H2O聽聽聽聽100聽ml
聽聽聽聽用0.22／lm的滤器过滤除菌。
聽
用于在滤膜上裂解酵母细胞的X-gal平板
这些平板是用来检测在Whatman聽3MM滤纸上裂解和固定的细胞中的β-半乳糖苷
酶的活性。
细菌培养用琼脂聽聽聽聽20g
1聽mol／L聽Na2HPO4聽聽57.7聽ml
1聽mol/L聽NaH2PO4聽42.3聽ml
MgSO4聽聽聽聽0.25聽g
H2O聽聽聽聽900聽ml
高压灭菌后，加6ml聽X-gal溶液(20mg／ml，用二甲基甲酰胺配置)。
聽
YPD(YEPD)培养基
YPD是用于酵母常规生长的复合培养基。
酵母提取物聽聽聽聽10g
蛋白胨聽聽聽聽20聽g
葡萄糖聽聽聽聽20g
加水至聽聽聽聽1000聽ml
制备平板时，在高压灭菌前加入20聽g细菌培养用琼脂(终浓度为2％)。
聽

聽

上一篇：霉菌和酵母菌介绍及检测方法

下一篇：酵母菌的形态观察